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Bioss 小課堂 | “單表位多抗”:多肽免疫導(dǎo)向的單表位多抗技術(shù)優(yōu)勢

更新時間:2025-10-09  |  點擊率:274

1.“單表位多抗" 的技術(shù)定義

“單表位多抗"  是基于 “單一確定序列多肽免疫" 制備的特殊多克隆抗體,核心特征是 “免疫原單一化 + 表位only性":

區(qū)別于傳統(tǒng)多抗(以完整蛋白/ 復(fù)雜抗原免疫),其免疫原是氨基酸序列明確的單一多肽—— 該多肽通常對應(yīng)目標(biāo)蛋白的特定功能區(qū)域(如活性位點、修飾位點),且可通過設(shè)計控制長度(通常 10-15 個氨基酸)以避免多表位風(fēng)險。免疫后,機體僅被誘導(dǎo)產(chǎn)生針對這一特定多肽表位的多克隆抗體(即多個 B 細(xì)胞克隆均靶向同一表位),因 “源于多克隆抗體庫",故得名 “單表位多抗"。隨著蛋白數(shù)據(jù)庫和結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展,“單表位多抗"在生物學(xué)研究中逐漸顯現(xiàn)諸多優(yōu)勢。



2.“單表位多抗" 的核心優(yōu)勢解析

2.1表位確定性:短肽設(shè)計鎖定識別位點

傳統(tǒng)多抗以完整蛋白或復(fù)雜抗原免疫時,機體將針對抗原上的多個表位產(chǎn)生抗體(如一個蛋白可能含5-10 個免疫原性表位),導(dǎo)致最終抗體混合物表位混雜,易出現(xiàn)交叉反應(yīng)(如與同源蛋白的相似表位結(jié)合)。

我公司結(jié)合多年抗體開發(fā)經(jīng)驗,設(shè)計“單表位多抗" 通過 “短肽設(shè)計+ 單一多肽免疫" 從源頭鎖定表位:

2.1.1 短肽物理層面杜絕多表位10-15 個氨基酸的短肽空間結(jié)構(gòu)簡單,通常僅含一個免疫原性表位,避免傳統(tǒng)完整蛋白或長肽(>20 個氨基酸)因序列過長導(dǎo)致的 “多表位混雜" 問題;

2.1.2 免疫導(dǎo)向聚焦單一表位:免疫原僅含一個確定的短肽序列,直接引導(dǎo)免疫系統(tǒng)聚焦該特定表位,最終獲得的多抗雖源于多個B 細(xì)胞克隆,但所有抗體均靶向同一表位;

2.1.3 按需定制靶向區(qū)域:可根據(jù)研究需求精準(zhǔn)選擇短肽(如針對蛋白磷酸化位點、活性中心的10-12 個氨基酸短肽),實現(xiàn) “表位定制化",從根本上解決傳統(tǒng)多抗 “識別模糊" 的問題,尤其適配蛋白修飾檢測、特定功能域靶向(如受體結(jié)合域)等場景;

2.1.4 多肽免疫原的物理特性控制:以我公司二十年的多肽抗體研發(fā)制備“功力",可保證多肽免疫原的可溶性、穩(wěn)定性、偶聯(lián)一致性、免疫原性等重要指標(biāo),從而保證抗體制備成功率在90%以上。

2.2抗體結(jié)合位點的解決方案

在抗體應(yīng)用中,“結(jié)合位點的精準(zhǔn)性、真實性與可控性" 是核心需求,而傳統(tǒng)單抗與多抗均存在明顯短板,“單表位多抗" 通過多肽免疫的特性,形成解決方案:

2.2.1 解決單抗結(jié)合位點未知的“盲目性" 痛點:傳統(tǒng)單抗雖表位單一,但制備時無法預(yù)先確定結(jié)合位點(需后續(xù)通過表位mapping 實驗驗證,耗時 1-2 周),在關(guān)鍵實驗中易踩坑 。而 “單表位多抗" 的結(jié)合位點即免疫用短肽對應(yīng)的序列,無需額外驗證,直接適配高要求場景如:

?抗體配對:雙抗夾心ELISA 中,可直接選擇靶向蛋白不同區(qū)域的短肽制備抗體,確保捕獲與檢測位點不重疊,配對成功率比傳統(tǒng)單抗提升;

?中和抗體研發(fā):以活性位點短肽為免疫原,抗體可直接結(jié)合目標(biāo)蛋白功能區(qū)域(如受體結(jié)合域、酶活性中心),無需從大量單抗中篩選中和活性克隆,大幅縮短研發(fā)周期;

?(藥物靶點/ 酶)活性調(diào)控:針對靶點活性中心設(shè)計短肽,抗體可精準(zhǔn)干預(yù)功能,避免傳統(tǒng)單抗因結(jié)合非活性位點導(dǎo)致的“無效調(diào)控";

?Co-IP 與亞細(xì)胞定位:選擇非互作區(qū)域/ 特定結(jié)構(gòu)域短肽,確保捕獲蛋白時保留互作復(fù)合物、定位時精準(zhǔn)指向膜內(nèi)或膜外;

2.2.2 規(guī)避單抗表位mapping 的 “假陽性" 陷阱:蛋白制備的單抗即便通過mapping,篩選出的肽段也可能位于蛋白空間結(jié)構(gòu)中心(天然狀態(tài)下被遮蔽,不暴露于表面),導(dǎo)致抗體能結(jié)合合成肽段卻無法識別天然蛋白——“單表位多抗" 的短肽優(yōu)先選取蛋白表面暴露區(qū)域(如AlphaFold 預(yù)測的親水性結(jié)構(gòu)、已知功能域暴露位點),且短肽更易模擬天然構(gòu)象,從源頭保證結(jié)合序列的真實性,確??贵w能識別天然樣本中的完整蛋白;

2.2.3 實現(xiàn)種屬反應(yīng)的“精準(zhǔn)可控":通過UniProt、NCBI 等數(shù)據(jù)庫比對短肽與不同種屬蛋白的同源性,可預(yù)先定制抗體的種屬特異性:

1.“種屬專屬"(如僅識別人源、不識別小鼠源):篩選人源蛋白中與小鼠差異大的短肽;

2.“跨種屬識別"(如同時識別人、大鼠、兔源):選擇高度保守短肽;

而傳統(tǒng)蛋白制備抗體因含多個表位(保守+ 物種特異性),種屬反應(yīng)范圍基本無法預(yù)測;

2.2.4 強化抗干擾能力與技術(shù)兼容性:可通過蛋白數(shù)據(jù)庫BLAST比對,僅識別特定短肽表位,可有效規(guī)避樣本中同源蛋白、雜蛋白的干擾;同時雖為多抗,但可像單抗一樣適配 Western Blot、ELISA、免疫組化(IHC)等技術(shù),且多抗的 “多分子結(jié)合" 特性在實驗中可實現(xiàn)多倍信號放大,兼顧特異性與靈敏度。

2.3 批間一致性:免疫原標(biāo)準(zhǔn)化實現(xiàn)低批間差

傳統(tǒng)多抗的批間差主要源于“免疫原差異" 與 “動物個體反應(yīng)差異":不同批次完整蛋白抗原可能含雜蛋白、純度波動,且動物免疫應(yīng)答強度、親和力存在個體差異,導(dǎo)致批間效價波動?!皢伪砦欢嗫? 通過 “免疫原固定化+ 流程標(biāo)準(zhǔn)化" 解決這一問題:

2.3.1 免疫原是化學(xué)合成的單一短肽,序列、純度可嚴(yán)格控制(如HPLC 純度>95%),不同批次無本質(zhì)差異;

2.3.2 免疫過程(動物品系、劑量、周期、采血時間)可標(biāo)準(zhǔn)化,減少個體差異影響;

2.3.3 進一步地,通過我公司“批批必檢"的質(zhì)控要求,最終批間效價偏差可控制在<10%,接近單抗的批間一致性水平,滿足科研重復(fù)性需求。

2.4 制備效率與成本優(yōu)勢:兼顧快速與高性價比

傳統(tǒng)單抗需“免疫 - 細(xì)胞融合 - 雜交瘤篩選 - 克隆純化"(全程 2-3 個月),技術(shù)難度高、成本高;傳統(tǒng)多抗雖快但表位混雜,“單表位多抗" 平衡兩者優(yōu)勢:

2.4.1 周期短:無需雜交瘤篩選,僅需“短肽合成(1周,效率遠高于蛋白表達)+ 動物免疫(3-4 周)+ 血清純化(1 周)",全程 4-6 周,而單抗制備需要接近6個月,縮短70%以上,比傳統(tǒng)多抗制備還快;

2.4.2 成本低:省去雜交瘤篩選的人力、設(shè)備成本(如細(xì)胞培養(yǎng)箱、流式細(xì)胞儀),短肽合成成本低于蛋白表達,規(guī)?;苽鋾r單位抗體成本僅為單抗的1/4-1/6,適合科研多靶點檢測、企業(yè)低成本批量開發(fā)檢測試劑。


3.優(yōu)勢總結(jié):定位“單表位多抗" 的技術(shù)價值

“單表位多抗" 的核心價值在于:以多抗的制備效率,實現(xiàn)單抗的表位特異性,同時通過 “抗體結(jié)合位點的解決方案",彌補傳統(tǒng)抗體在結(jié)合位點精準(zhǔn)性、真實性、可控性上的短板 —— 既解決傳統(tǒng)多抗 “表位混雜、批間差大" 的問題,又規(guī)避單抗 “周期長、成本高、結(jié)合位點未知、種屬不可控" 的局限,為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供 “高特異性、高穩(wěn)定性、高性價比、結(jié)合位點明確可控" 的抗體選擇,廣泛適配蛋白檢測、診斷試劑、科研探索、藥物靶點驗證等場景。


順便提示,我們還可基于相同的“精準(zhǔn)表位設(shè)計" 邏輯,為您定制單表位單抗" —— 讓科學(xué)家們也體驗一下“用精準(zhǔn)大狙對準(zhǔn)所需蛋白位點的爽感"。



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